NK 疗法是一种利用自体或异体 NK 细胞来治疗癌症及其他疾病的免疫疗法。NK 细胞，即自然杀伤细胞，是存在于人体血液、脾脏、淋巴结等组织器官中的一种免疫细胞。NK 细胞拥有强大的杀伤肿瘤细胞的能力，且对正常细胞的毒性较低，因而 NK 疗法成为一类极具前景的癌症治疗方法。
 

NK 疗法中细胞制备的难点

当前，多种 NK 细胞药物管线已进入临床试验阶段，并在治疗白血病、淋巴瘤和黑色素瘤等癌症方面展现出优异的数据。然而，由于 NK 细胞本身相对脆弱，其活性会受到多种因素影响。在生产工艺流程中，NK 细胞的获取、体外扩增以及冷冻保存等核心环节均会对 NK 疗法疗效的稳定性产生影响。其中，对 NK 细胞进行安全有效的冷冻保存是确保 NK 细胞质量、回输安全性以及 NK 药物成为货架药的重要环节，同时也是当下业内公认的难点。
 

NK 细胞实现冻存突破

Fate Therapeutics 是 CAR - iNK（iPSC 来源的 NK 细胞）疗法领域的探索先驱公司。其多款 iPSC 来源的工程化免疫细胞疗法已进入临床 I 期试验。2022 年，Fate 团队在 ASH（美国血液学年会）上展示了其对冻存工艺摸索的研究数据。Fate 使用筛选后的冻存液配方对其 iNK 产品 FT596（anti - CD19 CAR）和 FT536（anti - MICA/B CAR）进行了冻存可行性测试。

数据显示，考虑到临床端 NK 细胞药物复苏后可能无法立即进行回输，测试了细胞复苏后在冻存液中常温放置 5min、60min、90min 后 NK 细胞的活率、纯度、CAR 表达率和肿瘤杀伤能力，数据表明冻存 NK 细胞复苏后常温下稳定（图 1）；
冻存稳定性研究显示在 - 80℃和 <-150℃两种温度下冻存的 NK 细胞在冻存 4 周后依然保持相当的细胞活率、凋亡水平和增殖水平，不同冻存密度组间无显著差异（图 2）。
 
Fate 的研究展示了冻存 CAR - iNK 细胞的成功，并且可以在 - 80⁰C 和 <-150⁰C 下稳定储存，而不干扰药物产品的完整性、特性和功能。临床前数据显示了对照组和选定测试组之间有一致的活率、恢复和肿瘤杀伤效力。现货型免疫疗法的高密度冻存将进一步为临床医生和门诊血液病、实体瘤治疗的患者提供灵活性。

冷冻保存技术通过在超低温（-198°C 的液氮中）使细胞代谢停滞，从而保持细胞活性，延长细胞保存年限。经冷冻保存的细胞复苏后可以恢复代谢及活性并用于治疗及其他用途。冷冻保存过程中需要添加冷冻保护剂来保护细胞在冷冻和复苏的过程中免受损伤。

目前临床上广泛使用的是通用型细胞冻存液，并非针对 NK 细胞特性的定制化冻存液。